中科院从1985年开始立项建立的黄山灵芝培植基地至今已经22年，2003年国家实行中药 材培植规范办法后就通过了GAP认证，并获得“绿色基地”称号，是目前国内最为规范的灵芝培植基地。灵芝培植包含了三个方面的问题，一是灵芝菌种的选择，是开始，直接决定了灵芝孢子粉的品质；二是灵芝的种植，是一个复杂技术过程， 也影响了灵芝孢子粉的有效成分的含量和有效成分的提取率；三是灵芝孢子粉的优选，体现的是灵芝孢子粉原料是否纯正，质量是否上乘。
一、灵芝菌种的选择。
灵芝品种有120余种，在中科院灵芝项目研究组成立之前，中科院南京地理与湖泊研究所在研究自然与地理环境过程中就开始了药用真菌、药用植物的研究，以冯敏研究员为首的研究班底掌握了大量的科学资料和数据。迄今为止，从祖国大江南北、韩国、日本等世界范围内，我们已经搜集了几乎所有的灵芝品种，并加以详细的研究，建立了国内唯一的灵芝研究博物馆。20多年来，我们将灵芝的基础研究编纂成集，《灵芝的研究》、《癌基因的研究》、《科学抗癌》、《现代科学论灵芝》等灵芝研究专著相继推出。
经过大量的实验证实，从韩国引进的赤灵芝、紫芝是是100余种灵芝中药效价值最高、富含灵芝三萜的灵芝菌种，是作为抗癌用途的最佳品种，赤灵芝尤为突出。中科黄山灵芝基地的灵芝菌种就选择了赤灵芝。同时，我们专门成立了10人灵芝菌种鉴定专家组，参与每年一次的菌种引进工作，严格的把好品种关，100%保证了灵芝菌种的纯正性。
灵芝菌种的重要性在后续的利用过程中显得尤为重要，是决定性的，决定了能否提取出灵芝三萜类物质，能提出三萜类中对肿瘤有直接作用的种类，如四环三萜、五环三萜，同时也直接影响了灵芝孢子提出过程中的有效成分的提取率。举一个例子，在最新的灵芝三萜成分研究过程中，我们发现了新的重要抗癌成分X，奇怪的是只能从黄山种植的赤灵芝作为菌种收集而来的灵芝孢子粉中提取得到，而从黄山同样种植方法得来的其它菌种灵芝孢子粉中提取不出来。在后续的对比实验中，我们将同样的赤灵芝菌种放在安徽大别山、福建、辽宁等全国20多个地方种植，得来的孢子粉中也提取不出X成分。
经过大量的实验证实，从韩国引进的赤灵芝、紫芝是是100余种灵芝中药效价值最高、富含灵芝三萜的灵芝菌种，是作为抗癌用途的最佳品种，赤灵芝尤为突出。中科黄山灵芝基地的灵芝菌种就选择了赤灵芝。同时，我们专门成立了10人灵芝菌种鉴定专家组，参与每年一次的菌种引进工作，严格的把好品种关，100%保证了灵芝菌种的纯正性。
灵芝菌种的重要性在后续的利用过程中显得尤为重要，是决定性的，决定了能否提取出灵芝三萜类物质，能提出三萜类中对肿瘤有直接作用的种类，如四环三萜、五环三萜，同时也直接影响了灵芝孢子提出过程中的有效成分的提取率。举一个例子，在最新的灵芝三萜成分研究过程中，我们发现了新的重要抗癌成分X，奇怪的是只能从黄山种植的赤灵芝作为菌种收集而来的灵芝孢子粉中提取得到，而从黄山同样种植方法得来的其它菌种灵芝孢子粉中提取不出来。在后续的对比实验中，我们将同样的赤灵芝菌种放在安徽大别山、福建、辽宁等全国20多个地方种植，得来的孢子粉中也提取不出X成分。
二、灵芝菌种的培植。
众所周知，灵芝对生长环境的要求是非常高的。上世纪80年代，为了有效确保中科灵芝原材料的优良、纯正。中科院建立了中科黄山GAP（中药材生产质量管理规范）标准培植基地。在选择灵芝培植地点的时候，我们考察了很多地方，比如武夷山自然保护区，在1-3月因冬季过于干燥，夏季又气温偏高,这样的环境非常不适合灵芝子实体的成长,灵芝菌盖边缘的幼嫩生长点呈暗灰色或暗褐色，明显成分不好，又如罗田大别山，属北亚热带温暖湿润季风气候区，７月份最热平均气温23℃，夏季平均温度22℃，冬季平均气温10℃，年平均气温12.6℃，这样的环境也很不适合灵芝的生长。
过不断的筛选，最终选择了黄山海拔1000米左右的地方，是赤灵芝培植最佳的地方。一来是这里有丰富的、独有的栎树资源。黄山灵芝培植基地选择了栎树椴木作为灵芝培养基，可以充分吸收栎树和地质养分，这一点是与其它灵芝培植所不一样的。大多灵芝常用阔叶树及木屑、树叶、农作物秸秆、棉籽皮、玉米芯等，配加适量的麦麸或糠麸作为培养基，收集的灵芝孢子粉成分和功效大减。二来这里的气候环境得天独厚，温度、基质水分、空气含氧量、光照等非常适合灵芝生长，具备五大环境优势。第一，灵芝属高温性菌类，在15～35℃之间均能生长，适温为25～30℃。低于25℃，子实体生长缓慢，皮壳色泽也差，高于35℃，子实体会死亡。而黄山只有冷暖季，灵芝种植季节的时候进入暖季，温度非常适合；第二，灵芝生长需要较高的湿度。菌丝生长期，要求培养基含水量为55％～60％，空气相对湿度为70％～80％。子实体发育期，空气相对湿度要求在90％～95％。由于黄山峰高谷深，林木茂盛，降落的雨水不容易蒸发或流失，因此黄山湿度大、雾气重，这样一个环境湿度给灵芝提供了优越的生长条件；第三，灵芝是好气性真菌，它的整个生长发育过程中都需要新鲜的空气。尤其是子实体生长发育阶段，对二氧化碳更为敏感。当空气中二氧化碳含量增至0.1％时，子实体就不能开伞，长成鹿角状分枝，含量达1％时，子实体发育极不正常，无任何组织分化，形成畸形。而黄山1000米海拔处植物茂密，空气清新，空气的含氧量完全达到灵芝生长需要；第四，子实体生长发育不可缺少光照，在1500～5000勒克斯，菌柄、菌盖生长迅速，粗壮，盖厚。黄山基地山间云蒸雾绕，把日照强度调节得恰到好处，非常适合灵芝的生长；第五，黄山基地，风景旖旎，植物茂密，环境幽雅，是国家重点保护自然风景区，人烟稀少，纯天然，无污染。
过不断的筛选，最终选择了黄山海拔1000米左右的地方，是赤灵芝培植最佳的地方。一来是这里有丰富的、独有的栎树资源。黄山灵芝培植基地选择了栎树椴木作为灵芝培养基，可以充分吸收栎树和地质养分，这一点是与其它灵芝培植所不一样的。大多灵芝常用阔叶树及木屑、树叶、农作物秸秆、棉籽皮、玉米芯等，配加适量的麦麸或糠麸作为培养基，收集的灵芝孢子粉成分和功效大减。二来这里的气候环境得天独厚，温度、基质水分、空气含氧量、光照等非常适合灵芝生长，具备五大环境优势。第一，灵芝属高温性菌类，在15～35℃之间均能生长，适温为25～30℃。低于25℃，子实体生长缓慢，皮壳色泽也差，高于35℃，子实体会死亡。而黄山只有冷暖季，灵芝种植季节的时候进入暖季，温度非常适合；第二，灵芝生长需要较高的湿度。菌丝生长期，要求培养基含水量为55％～60％，空气相对湿度为70％～80％。子实体发育期，空气相对湿度要求在90％～95％。由于黄山峰高谷深，林木茂盛，降落的雨水不容易蒸发或流失，因此黄山湿度大、雾气重，这样一个环境湿度给灵芝提供了优越的生长条件；第三，灵芝是好气性真菌，它的整个生长发育过程中都需要新鲜的空气。尤其是子实体生长发育阶段，对二氧化碳更为敏感。当空气中二氧化碳含量增至0.1％时，子实体就不能开伞，长成鹿角状分枝，含量达1％时，子实体发育极不正常，无任何组织分化，形成畸形。而黄山1000米海拔处植物茂密，空气清新，空气的含氧量完全达到灵芝生长需要；第四，子实体生长发育不可缺少光照，在1500～5000勒克斯，菌柄、菌盖生长迅速，粗壮，盖厚。黄山基地山间云蒸雾绕，把日照强度调节得恰到好处，非常适合灵芝的生长；第五，黄山基地，风景旖旎，植物茂密，环境幽雅，是国家重点保护自然风景区，人烟稀少，纯天然，无污染。
三、灵芝孢子粉的优选。
中科院黄山灵芝基地承担了灵芝孢子粉原料优选工作，整个过程是相当的复杂。灵芝孢子粉收集到之后，首先是进行天然日晒，初步分离杂质。在晴朗的天气里，将孢子粉放在特制的容器里，使得孢子粉表面的水分蒸发掉，目的是便于用筛子将杂质和孢子粉进行初步分离。很多的厂家直接将分离出来的孢子粉当做原料来生产孢子粉产品，乃至作为生产灵芝孢子油的原料。而我们还要进行之后的二个自主发明的重要工序，还将剔除掉超过65%的细小杂质和质量较次的孢子粉，就是先进行13次的水过滤和3层水取工序。黄山灵芝基地特别制作了布满只能迎着阳光才能看得出微小细孔的筛子，将孢子粉溶入水中，经过13次筛选，将细小的杂质分离掉。之后将筛选出的水放入一个有三个泻水孔的大容器中，经过一段时间的沉淀后，干瘪和不饱满的孢子粉就悬浮在上半部分水中，而未分离出来的杂质则沉淀在下半部分的水中，饱满的灵芝孢子粉则处于中段部分的水中，技术人员取中间部分的水，放在温火上，等水完全蒸发之后就得到了质量上乘的孢子粉，再经过烘干和灭菌工艺处理。
南京中科集团拥有国际标准的GMP厂房（南京中科药业有限公司），与GAP黄山灵芝培植基地合二为一，保证了中科灵芝孢子油的质量，自动化生产进程管理系统为中科灵芝孢子油的优异品质又上了一道保险。
南京中科药业有限公司（江宁生产基地）由南京医药设计院按GMP规范设计，总投资6000万元，是目前国内生产规模最大的中药药品、中药保健品生产基地，已经通过国家GMP认证，并率先在国内通过ISO9000、OHSAS18000、ISO14000质量、职业安全、环境三位一体认证。自成立以来，先后接待了国家卫生部、国家药品管理监督局、中国科技部、中国科学院等数十批国家领导人和各级省、市领导。接待了国内外科研机构、专家学者、同类企业、国际友人、友好团体过千人。至今为止，来参观中科药业的全国各地的中科会员已超过万人。基地落成典礼上，中国科学院杨柏龄副院长评价“中国第一，世界领先”。
灵芝孢子油一个非常关键的技术是CO2超临界萃取，南京中科药业拥有国内最先进的大型CO2超临界萃取设备，改进了温度和压力的控制措施，采用自动化及程控温度压力控制系统，增强了萃取过程中有效成分识别和保证萃取成分稳定的能力。这是超临界流体力学研究领域的又一突破。
目前，中科灵芝孢子油消费者超过百万。质量是生命，容不得半点马虎。我们始终以对待自己生命的态度来抓生产工作。质量第一，这是中科对市场的保证，严谨的科研、全面的质量管理是中科产品立于不败之地的后盾。
四、十年面壁图破壁——--常温物理破壁技术
现代常温恒温纯物理破壁技术的先进之处在于把精选后的成熟灵芝孢子粉置于充满CO2的密闭容器中，不添加酸、碱、盐、中药、超微粒子等任何物质，在常温与恒温状态下采用震动、摩擦、超声波等一系列物理技术使之完全破壁，保证了百分百的纯灵芝孢子的生物活性成分。中科灵芝孢子的破壁成功，使得中国在灵芝研究领域跃居世界领先地位。据科学测定，中科灵芝孢子的实验室破壁率达到100%，大批量生产趋近100%以上，这是迄今为止世界文献范围内灵芝破壁率达到的最高值。
萃取孢子油需要很高的孢子破壁率，中科院有关单位采用CO2超临界萃取技术提取灵芝孢子油时发现，用未破壁的灵芝孢子作原料几乎没有提取量，加长时间，调整工艺，提高萃取压力后提取率也仅有0.2％左右，只有研制成功灵芝孢子的现代化物理破壁技术之后，采用破壁的灵芝孢子粉作原料，萃取率才提高上来，而且破壁率越高，萃取率越高。因此灵芝破壁技术被认为是成功提取灵芝孢子油的基础技术。
五、超临界CO2萃取技术——--唯一有效的提取方法
科研无止境，破壁孢子的成功，并没有缓解科研的脚步，随着灵芝研究的不断深入，1999年，中国科学院科学家以破壁灵芝孢子粉为原料，首次运用超临界CO2萃取技术提取出首例灵芝孢子脂溶性抗肿瘤成分，命名为灵芝孢子油。实验证实，每20克破壁灵芝孢子粉方能提取出1克灵芝孢子油，中科灵芝孢子油有效灵芝三萜含量比孢子粉高出20多倍。
超临界CO2萃取技术是具有世界先进水平的绿色生物分离技术。同时也是中科灵芝孢子油主要功效成分灵芝三萜含量集中与稳定的关键技术。由于萃取灵芝孢子油首先要对灵芝孢子在常温下进行破壁，而萃取不同物质又有特殊的强度、压力、流程等工艺要求，使“中科”灵芝孢子油的提纯技术在短时间内难以超越和模仿。
所谓CO2超临界萃取技术，是在一定温度和压力条件下，通过超临界状态的CO2萃取人们需要的物质有效成分。大家知道，物质通常有三态：即固态、液态、气态。但在特殊条件下，许多物态转化。处于转化过程中的物质兼具两态，这就是超临界状态。CO2的超临界状态即由气体转化为液体，被萃取物在这种状态下被析离，当CO2还原为气态并完全挥发后，被析离的物质成分就完整地被提取了出来，而杂质和无效成分就被分离出去。由于CO2无毒副作用，能完全挥发无残留，被萃取地有效成分特别纯净，特别全面，是当今萃取技术中最先进的，被我国列入“八五”国家科技攻关技术。
关键词：灵芝 灵芝孢子 灵芝孢子油 三萜 高效液相色谱 指纹图谱
灵芝是灵芝属真菌，是扶正固本的珍贵药材，灵芝三萜类化合物是灵芝主要的化学成分，目前已分离出150余种，三萜类化合物具有较强的生理活性，如抑制肿瘤细胞增殖，抗补体、抗艾滋病、保肝、抗血小板凝集、抗组织胺释放、抑制血管紧张素转化酶活性、降低胆固醇作用等。
中药指纹图谱是指中药经适当处理后，采用一定的分析手段，得到能够标示该中药特征的共有峰图谱，通过把握中药指纹的特征，有效地鉴别中药的质量，确保中药材及中成药质量相对稳定，现在已经成为控制中药质量的一种有效的方法。作者利用高效液相色谱，建立了灵芝孢子油三萜组分的高效液相指纹图谱。
4 结论
建立灵芝孢子油高效液相指纹图谱，有利于确保灵芝孢子油中三萜类化合物的质量稳定和可控。该方法能全面反映灵芝孢子油中所含三萜的种类和数量，有效地体现出中药成分的复杂性，并且能用来鉴别灵芝孢子油的真伪和是否掺杂。同时，也可为灵芝三萜类新药的研发提供药学研究资料。
中科院的科学家们经过六年的反复探索，终于发现，灵芝孢子油含有多种能够直接毒杀肿瘤细胞和间接抑制肿瘤生长的三萜类化合物，包括灵芝酸、孢子酸、赤芝孢子内脂等四环、五环三萜，它们均属于高度氧化的甾烷衍生物，能有效破坏肿瘤癌细胞端粒酶。
科研机构研究证明了赤灵芝孢子内的灵芝三萜可直接或间接毒杀肿瘤细胞；灵芝三萜类能够迅速提高免疫力，促进淋巴细胞增殖，提高巨噬细胞、NK细胞、T细胞的吞噬能力和杀伤力；并直接和间接毒杀肿瘤细胞，同时能够激活化疗药物难以杀死的Go期肿瘤细胞，进行单独或联合毒杀。灵芝三萜具有明显的止痛、镇静效果。在药学研究过程中，还意外发现灵芝三萜对抑制血栓形成、对人类免疫缺陷病毒HIV的增生和乙肝肝病病毒也有较为显著的抑制效果。
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