人体及外源补充超氧化物歧化酶测定及其临床应用

　　摘要目的:建立一种化学发光测定超氧化物歧化酶(SOD) 的新方法,探讨临床SOD 活力变化及SOD 在血液透析疗法延缓肾衰中的作用。

　　方法:根据SOD 抑制超氧阴离子(O2-· ,黄嘌呤一黄嘌呤氧化酶体系生成) 诱导的海萤萤光素(CLA ,2 - Methyl - 6 -phenyl - 3 ,7 - dihydroimidazo - [1 ,2 -α] pyrazine - 3 - one) 化学发光程度测定SOD 活力。共检测正常组50 例,病理组205 例,血液透析组28 例。

　　1 对象和方法

　　研究对象

　　正常组为年龄21～52 岁本院体检正常之工作人员,男女兼有,共50 例。

　　病理组为临床已确诊的本院住院病人,共计205 例。其中慢性肾炎组46 例,年龄32～56 岁;慢性肾功能不全氮质血症期组24例,年龄40～52 岁;尿毒症组35 例,年龄28～54 岁;高血压组25 例,年龄35～68 岁;糖尿病组25 例,年龄40～59 岁;胆囊炎组25 例,年龄34～57 岁; SL E 组25 例,年龄18～44 岁。以上各组病例均男女兼有。

　　血液透析组为慢性肾功能不全尿毒症期做血液透析治疗患者,计28 例,年龄32～61 岁,透析年限2～6 年,男女兼有。

　　测定方法

　　标本采取为临床护理部门在检测当天上午7 :30～8 :30 间抽取住院病人静脉或动脉血置肝素抗凝管中,加硅胶塞立即摇匀,使完全抗凝后送检。

　　血浆和红细胞SOD 活性测定用化学发光法。抽患者动脉血或静脉血2 ml ,肝素抗凝后2000 r/ min 离心5 min ,取上清液血浆用生理盐水稀释10 倍后作血浆SOD 测定;另取沉淀红细胞100μl ,用1 ml 生理盐水洗涤2～3次,取经洗涤的沉淀红细胞10 μl ,用氰化高铁法测血红蛋白含量,再取10 μl 以冷双蒸馏水400μl 溶解后,加无水乙醇及三氯甲烷各200μl ,旋涡混匀1 min ,4000 r/ min 离心5 min ,取上清液测SOD 作为红细胞SOD。SOD 活性测定系统采用由黄嘌呤氧化酶- 黄嘌呤- CLA -PBS 缓冲系统(0105 mol/ L ,pH 516) 组成(黄嘌呤氧化酶、黄嘌呤为Sigma 产品,CLA 为东京化成株式会社产品) ,测定时设对照管和测定

　　管,各管中先加PBS 缓冲液600 μl , EDTA -Na2溶液(1 mmol/ L) 100 μl ,黄嘌呤溶液(1

　　mmol/ L) 100μl ,CLA 溶液(5μmol/ L) 100μl ,测定管中再加10μl 处理样本,对照管中加10μl 生理盐水,放入发光仪(BLR - 201 ,日本刀口力株式会社生产) 测试室,最后加入100 μl 黄嘌呤氧化酶溶液(45 mU/ ml) 启动反应并开始测定,仪器自动记录并打印出样本测定管及对照管1 min 末的发光强度值,以抑制对照管发光强度的50 %所需SOD 浓度为一个活力单位,结果再乘以样本稀释倍数,并作相应的单位换算, 血浆SOD 活性以U/ ml 表示, 红细胞

　　SOD 活性以U/ g·Hb 表示。

　　由表1 测定结果可见,各病理组SOD 测定结果以血浆值较正常组有明显改变,而红细胞值较正常组除SL E 组有明显降低外,余未见明显变化。高血压组血浆SOD 非常显著高于正常组( P < 0101) ,SL E 组血浆SOD 非常显著低于正常组( P < 0101) ,糖尿病组血浆SOD显著低于正常组( P < 0105) ,慢性肾功能不全氮质血症期组血浆SOD 显著低于正常组( P< 0105) ,而终末期尿毒症组病人血浆SOD 则非常显著低于正常组( P < 0101) ,胆囊炎组、慢性肾炎组血浆SOD 与正常组相比无显著改变( P > 0105) 。临床病人红细胞测定较血浆为复杂,且红细胞测定不如血浆测定更有临床意义,故测定临床病人血浆SOD 可反映病人体内抗氧自由基水平。慢性肾功能不全尿毒症期患者血流透析治疗前后血浆及红细胞SOD 活性变化结果

　　见表2 ,结果以.x ±s 表示,统计学方法运用t检验。

　　由表2 测定结果可见,慢性肾功能不全尿毒症期患者血液透析后较透析前无论是血浆还是红细胞SOD 测定值均有增高,且非常显著( P < 0101) 。正常组与病理组血浆及红细胞SOD 测定值的相互比较见表1 。所有结果均以.x ±s表示,运用的统计学方法则根据方差齐性检验结果决定,两组方差齐同则运用t 检验,两组方差不齐同运用校正t 检验( t′检验) 。

　　结果: (1) 血浆SOD :糖尿病、慢性肾功能不全与正常组间t 检验均有显著差异,高血压、SL E、尿毒症与正常组间t 检验均有高度显著差异,胆囊炎、慢性肾炎与正常组间均无显著差异。(2) 红细胞SOD :除SL E 与正常组间t 检验有显著差异外,余均无显著差异。(3) 血液透析前后血浆及红细胞SOD :透析前与透析后有高度显著差异。

　　结论: (1) 血浆SOD 可反映临床病人体内抗氧自由基水平,而红细胞SOD 测定临床意义不大。(2) 血液透析疗法可激活体内抗氧自由基活性,消除体内

　　过多的氧自由基,减轻氧自由基对人体造成进一步损害,以达到延缓肾衰的治疗目的。