人Trim5α嵌合体蛋白与HIV-1gag蛋白体外分子间相互作用的鉴定

中国生物工程杂志 2009.5 Vol 29, No.5 1-5

孟祥平李秀英孙晗笑莫雪梅

暨南大学药学院基因组药物研究所

Key Words： The interaction between Human Trim5α Chimerae and HIV-1gag Protein in Vitro

Abstract
目的:表达和纯化人TRIM5α嵌合体蛋白［TRIM5α-H(R328-332)］，并探讨该蛋白和HIV-1gag间的相互作用。方法:将构建的TRIM5α嵌合体pET-28a-TRIM5α-H(R328-332)，转化大肠杆菌BL21(DE3) ,获得重组表达质粒pETTRIM5α-H(R328-332)，30℃下经IPTG诱导，该融合蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)中表达。获得的重组的蛋白再经过纯化，SDS-PAGE分析重组蛋白，并用免疫共沉淀技术和ELISA等检测重组蛋白与HIV-1 gag间的相互作用。结果:构建的重组质粒在大肠杆菌中获得表达，重组TRIM5α-H(R328-332)蛋白经纯化复性后，通过免疫共沉淀和ELISA等技术,证明TRIM5α-H(R328-332)蛋白能够与HIV-1gag间的相互作用。结论:在大肠杆菌表达系统中成功表达了重组TRIM5α-H(R328-332)蛋白，并且证实其在体外与HIV-1gag有结合作用。[摘要]　目的:表达和纯化人Trim5α嵌合体蛋白[Trim5α H(R328-332)]，并探讨该蛋白和HIV-1gag间的相互作用。方法:将构建的Trim5α嵌合体pET 28a Trim5α H(R328-332)，转化大肠杆菌BL21(DE3) ,获得重组表达质粒pETTrim5α H(R328-332)，30℃下经IPTG诱导，该融合蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)中表达。获得的重组的蛋白再经过纯化，用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析重组蛋白，并用免疫共沉淀技术、His pull down和ELISA等检测重组蛋白与HIV-1gag间的相互作用。结果:构建的重组质粒在大肠杆菌中获得表达，经纯化后的重组Trim5α H(R328-332)蛋白纯度可达90%以上。通过免疫共沉淀、GST pull down和ELISA等技术,证明Trim5α H(R328-332)蛋白能够与HIV-1gag间的相互作用。结论:本实验在大肠杆菌表达系统中成功表达了重组Trim5α H(R328-332)蛋白，并且证实其在体外与HIV-1gag有结合作用。

Abstract
To express and purify the TRIM5α chimaera［TRIM5α-H(R328- 332)］ protein and to explore the interaction between the TRIM5α H(R328- 332)and HIV-1gag. Methods: The plasmid pET28aTRIM5α H(R328-332) was transformed to E.coli BL21 (DE3) strain , and the expression of TRIM5α H(R328-332) protein was induced by IPTG，purified with Ni2+ chromatography.The expression and purification of TRIM5α H(R328-332) were analyzed by SDS-PAGE and Western blot,and the interaction between TRIM5α-H(R328-332) and HIV-1gag was detected by co-immunoprecipitation, His pull-down and ELISA. Results:The recombinant plasmid pET28aTRIM5α H(R328-332) was successfully expressed in E.coli. The results showed that the purified full length TRIM5α-H(R328-332) interacted with HIV-1gag protein. Conclusion: The human TRIM5α-chimaera was expressed successfully in vitro, and the study demonstrates that the human TRIM5α-chimaera interacts with HIV-1 gag in vitro.

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